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内容简介

植物细胞与组织研究方法是生物类、大农学类的大学生、研究生的一门重要课程，也是一门重要的实验技术。《植物细胞与组织研究方法》根据编者多年的教学、科研积累以及实验技能整理而成。《植物细胞与组织研究方法》主要介绍植物细胞与组织研究中广泛应用和实用的内容和方法，包括植物制片技术（如石蜡切片、半薄切片、木材切片、徒手切片、印痕技术、离析技术、涂压技术等）、植物组织与细胞化学、各种显微技术（如正置显微技术、倒置显微技术、荧光显微技术、体视显微技术、显微操作技术等）、图像采集、图像处理、全书图文并茂，既系统地介绍了当今植物细胞与组织的研究方法，又突出了实验技术要点。

目录

第一篇 植物细胞与组织制片原理
1 植物制片的目的和方法
1.1 植物制片简介
1.1.1 植物制片目的
1.1.2 植物制片方法
1.2 植物制片常用仪器、用具、药品
1.3 植物制片一般流程
1.3.1 一般制片
1.3.2 石蜡/半薄切片
1.4 植物制片相关常用技术
1.4.1 清洁技术
1.4.2 封边与封片（藏）技术
1.4.3 切片刀的磨刀技术
2 植物制片的原理
2.1 选材
2.1.1 材料的选择
2.1.2 材料的切取
2.2 杀死、固定与保存
2.2.1 杀死、固定与保存
2.2.2 固定的基本原理
2.2.3 常用的固定剂
2.2.4 固定操作注意事项
2.3 洗涤
2.3.1 洗涤的作用
2.3.2 洗涤的方法
2.4 脱水剂与脱水
2.4.1 脱水
2.4.2 常用的脱水剂
2.5 透明剂与透明
2.5.1 透明的作用
2.5.2 常用的透明剂
2.6 制片
2.7 染色剂与染色
2.7.1 染色的发现与染色原理
2.7.2 染色剂的概念与性质
2.7.3 染色剂的种类
2.8 封固与封固剂
2.8.1 水溶性封固剂
2.8.2 糖浆封固剂
2.8.3 树脂性封固剂
2.8.4 其它封固剂
3 常用染色剂及染色方法
3.1 常用染色剂
3.1.1 苏木精（Haematoxylin）
3.1.2 洋红（Carmine）
3.1.3 番红O（Safranin Y或afranin A）
3.1.4 亮绿（Light Green）
3.1.5 固绿（Fast green）
3.1.6 孔雀绿（Malachite Green）
3.1.7 甲基绿（Methyl Green）
3.1.8 碘绿（Iodine Green）
3.1.9 结晶紫（Crystal Violet）
3.1.10 橘红G（Orange G）
3.1.11 曙红（Eosin）
3.1.12 真曙红（Erythrosin）
3.1.13 中性红（Neutral red）
3.1.14 酸性品红（复红）（Acid fuchsin）
3.1.15 碱性品红（复红）（Basic Fuchsin）
3.1.16 刚果红（Congo Red）
3.1.17 甲苯胺蓝（Toluidine blue）
3.1.18 甲基蓝（Methyl blue）
3.1.19 亚甲基蓝（Methylene Blue trihydrate）
3.1.20 苏丹Ⅲ（Sudan Ⅲ）
3.1.21 苏丹Ⅳ（Sudan Ⅳ）
3.1.22 苯胺蓝（Cotton Blue）
3.1.23 地衣红（Orcein）
3.1.24 天青石兰（Celestine Blue）
3.1.25 苦味酸（Picric Acid）
3.1.26 俾斯麦棕（Basic Brown）
3.1.27 玫瑰红（Rhodamine）
3.1.28 詹纳斯绿（Janus Green）
3.1.29 红四氮唑（2，3，5�睺riphenyltetra�瞶olium chloride）
3.1.30 间苯三酚（Phloroglucinol dihydrate）
3.2 染色方法
3.2.1 染色方法的种类
3.2.2 常用的染色方法与步骤
3.3 染色中必须注意的几个问题
3.3.1 染色液浓度
3.3.2 染色温度与时间
3.3.3 固定液对于染色的影响
3.3.4 染色时应注意的几个问题
第二篇 植物细胞与组织制片方法
4 石蜡切片法
4.1 取材、固定、保存、洗涤
4.1.1 取材
4.1.2 固定
4.1.3 冲洗
4.2 脱水、透明
4.2.1 脱水
4.2.2 透明
4.3 浸蜡
4.4 包埋
4.4.1 包埋方法
4.4.2 包埋石蜡选择
4.5 修块、切片
4.5.1 修块、粘固
4.5.2 组织切片机的结构及操作步骤
4.5.3 切片注意事项
4.6 粘片、展片、烤片（烘片）
4.7 脱蜡、复水、染色、脱水、透明
4.8 封片
5 半薄切片技术
5.1 水溶性树脂包埋
5.1.1 GMA包埋法
5.1.2 Quetol 523包埋
5.1.3 JB-4包埋
5.1.4 Lowicryl K4M包埋法
5.2 环氧树脂包埋法
5.2.1 环氧树脂包埋的机制和配方
5.2.2 材料洗涤、脱水
5.2.3 渗透与聚合
5.3 修块和切片
5.3.1 修块
5.3.2 切片刀
5.3.3 切片注意事项
5.4 染色
6 非切片制片
6.1 暂时封藏
6.1.1 简易观察制片
6.1.2 孢子及花粉粒萌发观察制片
6.2 整体制片
6.2.1 甘油法
6.2.2 甘油冻胶法
6.2.3 甘油�捕�甲苯法
6.2.4 糖浆法
6.2.5 水封藏法
6.2.6 松节油法
6.3 涂压制片
6.3.1 涂压法的基本步骤
6.3.2 植物花粉母细胞的涂片法
6.3.3 植物根尖、茎端的压片法
6.4 离析制片
6.4.1 硝酸�猜然�钾离析法（Schaltze法）
6.4.2 铬酸�蚕跛崂胛龇ǎ═effrey法）
6.4.3 乙酸�补�氧化氢离析法
6.4.4 煮沸法
6.4.5 盐酸�膊菟崂胛龇�
6.4.6 氨水离析法
6.4.7 氢氧化钠离析法
6.4.8 乙醇�惭嗡崂胛龇�
6.4.9 次氯酸钠法
6.5 透明制片
6.5.1 乳酸�脖椒油该鞣�
6.5.2 氢氧化钠透明法
6.5.3 冬青油透明法
6.5.4 甘油透明法
7 植物细胞与组织显微测定
7.1 碳水化合物显微测定
7.1.1 高碘酸�蚕７蚍从Α�—显示多糖（淀粉粒及细胞壁纤维素等）
7.1.2 碘�驳饣�钾反应——显示淀粉粒
7.1.3 氯化铁羟胺反应——显示果胶
7.1.4 氯碘化锌反应——显示纤维素
7.1.5 氯代亚硫酸盐法——显示木质素
7.1.6 苯胺蓝荧光法——显示胼胝质
7.1.7 亚硫酸铁反应——显示单宁
7.1.8 银还原法——显示维生素C
7.2 脂类显微测定
7.2.1 苏丹染料染色法——显示全部脂类
7.2.2 Nile蓝法——显示中性脂肪及酸性类脂
7.2.3 锇酸染色法——显示中性不饱和脂类
7.2.4 酸性氧化苏木精法——显示磷脂
7.2.5 过甲酸�蚕７蚍ā�—显示不饱和键脂类
7.2.6 丙二醇苏丹法——显示类脂
7.3 蛋白质的显微测定
7.3.1 汞�蹭宸永斗ā�—显示总蛋白质
7.3.2 茚三酮（或四氧嘧啶）�蚕７蚍从Α�—显示总蛋白质
7.3.3 氯胺�睺�蚕７蚴约练从Α�—显示总蛋白
7.3.4 固绿染色法——显示总蛋白质或碱性蛋白
7.3.5 偶联四唑反应——显示含色氨酸、组氨酸和酪氨酸的蛋白质
7.3.6 重氮化偶联反应——显示含酪氨酸蛋白质
7.3.7 Sakagushi反应——显示含精氨酸蛋白质
7.3.8 对二甲氨基苯甲醛反应——显示含色氨酸蛋白质
7.3.9 铁氰化铁法——显示蛋白质—SH基
7.3.10 汞橙（RSR）法——显示蛋白质—SH基
7.3.11 巯基乙酸�蔡�氰化铁法——显示蛋白质—SS基
7.3.12 过甲酸�蚕７蚴约练从Α�—显示—SS基蛋白质
7.3.13 过甲酸�睞lcian蓝法
7.4 核酸的显微测定
7.4.1 孚尔根反应——显示DNA
7.4.2 甲基绿�才陕迥�（焦宁）染色法——显示DNA与RNA
7.4.3 苏木精色法
7.4.4 铁矾�菜漳揪�染色
7.5 酶的显微测定
7.5.1 联苯胺反应——显示过氧化物酶
7.5.2 氯化三苯四氮唑（TTC）法——显示脱氧酶
7.5.3 四氮唑盐反应——显示琥珀酸脱氢酶
7.5.4 Nadi反应——显示细胞色素氯化酶
7.5.5 铅沉淀法——显示酸性磷酸酶
7.5.6 钙�差艹恋矸ā�—显示碱性磷酸酶
7.5.7 铅沉淀法
7.5.8 钙皂沉淀法——显示酯酶
7.5.9 靛蓝法——显示酯酶
7.5.10 邻苯二酚法——显示多酚氧化酶
7.6 细胞壁成分显微测定
7.6.1 纤维素测定
7.6.2 木质素测定
7.6.3 角质、栓质测定
7.6.4 果胶质测定
7.7 活体染色
7.7.1 线粒体活体染色
7.7.2 液泡活体染色
8 其它切片技术
8.1 徒手切片
8.1.1 徒手切片法的应用及优缺点
8.1.2 徒手切片操作过程
8.1.3 过程小结
8.2 滑走切片
8.2.1 滑走切片方法和步骤
8.2.2 材料的软化处理方法
8.3 蒸汽切片
8.4 冰冻切片
8.4.1 冰冻的原理
8.4.2 利用专用冰冻切片机和干冰进行切片
8.4.3 切片过程
8.4.4 半导体式冷冻切片机
8.4.5 恒冷箱式冷冻切片机
8.5 木材切片
8.5.1 直接切片
8.5.2 包埋切片
第三篇 显微镜与显微技术
9 显微镜简介
9.1 显微镜分类
9.2 显微镜基本原理
9.2.1 透镜成像的基本知识
9.2.2 显微镜光学系统成像
9.3 显微镜光学技术参数
9.3.1 透镜分辨率
9.3.2 分辨极限与放大率
9.3.3 景深
9.3.4 焦距和角孔径
9.3.5 色差
9.3.6 齐焦距
9.3.7 同轴度
9.3.8 覆盖差
9.3.9 工作距离
9.3.10 镜像亮度
10 常用显微镜
10.1 正置显微镜
10.1.1 机械部分
10.1.2 光学部分
10.1.3 照明系统
10.1.4 显微镜维护与保养
10.2 倒置显微镜
10.2.1 倒置显微镜简介
10.2.2 Olympus�瞂I 71倒置显微镜
10.2.3 透射光明场观察步骤
10.2.4 相衬观察（使用IX2�睮LL100照明柱）
10.2.5 微分干涉衬（DIC）观察（使用IX2-ILL100照明柱）
10.2.6 简易偏光观察（使用IX2-ILL100照明柱）
10.3 体视显微镜的原理、结构与使用
10.3.1 体视镜光路
10.3.2 普通变焦体视镜
10.3.3 Olympus SZX16型解剖镜
10.4 荧光显微镜
10.4.1 荧光原理
10.4.2 荧光显微镜原理
10.4.3 荧光显微镜结构
10.4.4 荧光显微镜使用
11 显微图像捕获及处理
11.1 显微图像捕获
11.1.1 显微图像捕获
11.1.2 Olympus DP71图像捕获系统
11.2 图像处理
11.2.1 图像数字化
11.2.2 位图的有关术语
11.3 Image-Pro Plus图像处理软件
11.3.1 Image-Pro Plus窗口
11.3.2 Image-Pro Plus操作
附录
参考文献

精彩书摘

人类对于植物的研究发展至今，己从对于植物整体、根、茎、叶、花、果实等宏观形态、器官的观察、研究，经过植物的组织、细胞水平的研究，发展至现代分子水平的研究。对于组织、细胞及更深入的结构层次，绝大部分自然状态的植物材料并不能够直接用于研究操作、进一步的微观研究。要对植物微观结构进行研究（器官解剖观察、花芽分化、授粉受精、贮藏营养规则、染色体观察等），就必须将原先体积大、透明性差的植物材料进行特殊的处理，使其体积变小、厚度变薄、透光性增强而能够有可能用于显微观察。在进行显微观察时，如何区分生活或死亡的组织与细胞的不同显微结构（如细胞壁、细胞膜、细胞核、细胞质、各类细胞器、染色体）、同一显微结构的不同组成成分（纤维素、果胶、蛋白质、糖类等）以及如何对某一具体的结构、成分进行特定观察，则需要对样品材料进行不同的染色处理，使各结构、成分吸附特定染料或发生化学反应而呈现不同颜色，进行区分。
植物制片就是要将较大的、不透明的、难于进行显微观察的植物材料进行各种特定处理，使其成为可以在显微境下观察的、小而薄、完整透明、可明显区分不同结构和成分而又保持原先结构、状态的实验材料。
……

前言/序言

《植物细胞与组织的研究方法》是一门理论与实践紧密结合的实验生物学课程。随着生命科学的发展以及学科间的交叉与渗透，植物细胞与组织的研究不仅是经典植物学研究的必备技术，而且已成为现代遗传学、现代园艺学、分子生物学、植物与微生物分子互作等研究的重要技术。为了探索积累经验，近年来在学校生命科学学院和研究生处的支持下，我们对该课程的教学体系、教学条件、教学内容和教学方法等做了相应的调整、补充和改革，以全面提高研究生的实践教学、帮助学生在理解实验原理的基础上熟练掌握关键技术，培养学生综合分析能力。由于形成新的教学体系和教学内容，不少师生都向研究生处反映，希望编写一本既全面而又实用的研究工具书。为了满足这一要求，我们聘请了在该领域研究上有丰富实践经验的专家撰写了这本研究生教材。
《植物细胞与组织的研究方法》在内容上既反映了显微技术的较新成就，又注重切合当前教学实际需要。书中第一篇介绍植物细胞与组织研究特别是植物制片的基本原理，从制片原理、制片过程、染色原理、染色过程等全方位进行详细的阐明。第二篇介绍常用的植物制片技术，既包括传统的切片技术（如石蜡切片、徒手切片、半薄切片等）、非切片技术（涂压制片、整体制片、透明制片、离析制片等），同时又介绍了植物显微化学相关原理、技术［如细胞壁成分显示与测定、蛋白质显示与测定、脂类显示与测定、核酸（DNA）显示与测定、糖类染色与测定等］。本书还简要介绍了部分现代植物生理学、遗传学等相关领域的部分研究技术，如细胞器（叶绿体、线粒体、液泡）分离、染色、观察技术、DNA显色分析技术等。
对于显微观察、摄影方面，本书着重介绍常用的正置显微镜、倒置显微镜、体视显微镜、荧光显微镜等显微镜的基础原理、镜体结构、使用操作等。介绍图像捕获原理及显微拍摄软件的使用、显微图像的基本处理、数据测定。
《植物细胞与组织的研究方法》内容丰富，汇集了经典植物细胞学、细胞生物学及植物细胞工程中多种常用的研究方法，可供农林院校的相关专业研究生和科学工作者参考。
由于编者水平有限，书中难免有疏漏之处，敬请广大读者指正批评。
编者
2010年8月

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