分子剋隆實驗指南（精編版） [THE CONDENSED PROTOCOLS FROM MOLECULAR CLONING:A LABORATORY MANUAL] pdf epub mobi txt 電子書 下載 2025

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J.薩姆布魯剋（JOSEPH SAMBROOK） 等 著

圖書標籤:

• 分子剋隆
• 分子生物學
• 實驗指南
• 生物技術
• 基因工程
• DNA剋隆
• PCR
• 限製性內切酶
• 載體
• 轉化

齣版社： 化學工業齣版社

ISBN：9787122011480

版次：1

商品編碼：10067935

包裝：平裝

外文名稱：THE CONDENSED PROTOCOLS FROM MOLECULAR CLONING:A LABORATORY MANUAL

開本：16開

齣版時間：2008-01-01

頁數：693

正文語種：中文

內容簡介

　　《分子剋隆實驗指南(精編版)》作為一本準確、可靠、明晰的實驗操作手冊，獲得廣泛的贊譽，已成為分子生物學工作者必備的案頭工具書。
　　第三版在前兩版的基礎上對圖書內容進行徹底的更新，修改瞭每一個方案，增加瞭大量的新內容，拓寬瞭學科範圍，涵蓋瞭各類常規技術、成熟技術和新技術，這些實驗技術都是目前世界範圍內分離、分析和剋隆DNA分子很好實驗室日常工作中經常用到的。
　　精編版專為實驗颱邊的工作者設計，對於遺傳學、分子生物學、細胞生物學、發育生物學、神經科學和免疫學專業的學生具有無與倫比的價值，同時給單個研究者提供瞭“一書在手、方案全覽”的便利。

目錄

第1章 分子剋隆中使用的質粒載體的製備
方案1.1 SDS堿裂解法製備質粒DNA：小量製備
方案1.2 SDS堿裂解法製備質粒DNA：中量製備
方案1.3 SDS堿裂解法製備質粒DNA：大量製備
方案1.4 煮沸法小量製備質粒DNA
方案1.5 煮沸法大量製備質粒DNA
方案1.6 用牙簽挑取菌落小量製備質粒DNA
方案1.7 SDS裂解法製備質粒DNA
方案1.8 聚乙二醇沉澱法純化質粒DNA
方案1.9 層析法純化質粒DNA
方案1.10 氯化銫�蹭寤�乙錠梯度平衡離心法純化閉環DNA：連續梯度法
方案1.11 氯化銫�蹭寤�乙錠梯度平衡離心法純化閉環DNA：不連續梯度法
方案1.12 有機溶劑萃取法從DNA中去除溴化乙錠
方案1.13 離子交換層析法從DNA中去除溴化乙錠
方案1.14 NaCl離心法去除質粒DNA樣品中的小片段核酸
方案1.15 Sephacryl S��1000層析法去除質粒DNA樣品中的小片段核酸
方案1.16 氯化鋰沉澱法去除質粒DNA樣品中的小片段核酸
方案1.17 在質粒載體中進行定嚮剋隆
方案1.18 在黏性末端上連接接頭
方案1.19 在質粒載體中進行平末端剋隆
方案1.20 質粒DNA的去磷酸化
方案1.21 平末端DNA連接閤成的接頭
方案1.22 在低熔點瓊脂糖中連接質粒和目的DNA
方案1.23 製備和轉化大腸杆菌感受態的Hanahan 方法：高效的轉化 方法
方案1.24 製備和轉化感受態大腸杆菌的Inoue 方法：超級感受態細胞
方案1.25 氯化鈣製備大腸杆菌感受態
方案1.26 大腸杆菌的電轉化
方案1.27 用X�瞘al和IPTG篩選細菌剋隆：α互補
方案1.28 小量細菌剋隆的雜交篩選
方案1.29 中量細菌剋隆的雜交篩選
方案1.30 大量菌落的雜交篩選
方案1.31 菌落的裂解和DNA與濾膜的結閤
方案1.32 在濾膜上進行細菌DNA的雜交

第2章 λ噬菌體及其載體
方案2.1 λ噬菌體的平闆培養
方案2.2 λ噬菌體噬菌斑的挑取
方案2.3 通過平闆裂解和洗脫製備λ噬菌體原種
方案2.4 用小量液體培養製備λ噬菌體原種
方案2.5 λ噬菌體的大規模培養：低倍數感染
方案2.6 從大規模裂解物中沉澱λ噬菌體顆粒
方案2.7 通過凝膠電泳測定λ噬菌體原種和裂解物中DNA的含量
方案2.8 通過CsCl等密度梯度離心純化λ噬菌體顆粒
方案2.9 通過甘油分 級梯度離心純化λ噬菌體顆粒
方案2.10 通過沉澱/離心純化λ噬菌體顆粒
方案2.11 用蛋白酶K和SDS從大規模培養物中提取λ噬菌體DNA
方案2.12 用甲酰胺從大規模培養物中提取λ噬菌體DNA
方案2.13 用作剋隆載體的經單一限製性酶切割的λ噬菌體DNA的製備
方案2.14 用作剋隆載體的雙限製性酶切割的λ噬菌體DNA的製備83
方案2.15 λ噬菌體載體DNA的堿性磷酸酶處理
方案2.16 λ噬菌體臂的純化：通過蔗糖密度梯度離心
方案2.17 用於基因組文庫中的真核DNA的部分 酶切：預反應
方案2.18 用於基因組文庫的真核DNA的部分 酶切： 製備反應
方案2.19 λ噬菌體臂與外源DNA片段的連接
方案2.20 基因組文庫的擴增
方案2.21 噬菌體DNA從噬菌斑轉移到濾膜98
方案2.22 噬菌體DNA在濾膜上的雜交
方案2.23 λ噬菌體快速分 析：從平闆裂解物中純化λDNA
方案2.24 λ噬菌體分 離物的快速分 析：從液體培養物中純化λDNA
第3章 M13噬菌體載體
第4章 高容量載體的應用
第5章 DNA凝膠電泳和脈衝場瓊脂糖凝膠電泳
第6章 真核基因組DNA的製備和分 析
第7章 真核細胞mRNA的提取、純化和分 析
第8章 聚閤酶鏈反應體外擴增DNA
第9章 放射性標記DNA探針與RNA探針的製備
第10章 人工閤成的寡核苷酸探針
第11章 cDNA文庫製備及基因鑒定
第12章 DNA測序
第13章 誘變
第14章 錶達文庫的篩選
第15章 剋隆基因在大腸杆菌中的錶達
第16章 剋隆基因轉入培養的哺乳動物細胞
第17章 哺乳動物細胞基因錶達分 析
第18章 蛋白質相互作用研究技術
附錄
索引

前言/序言

探索生命奧秘：現代生物學實驗技術精要 一本聚焦於前沿生物學核心技術的實踐手冊 本書籍旨在為生物學、生物技術以及相關交叉學科的研究人員、高級學生和實驗室技術人員，提供一套全麵、係統且高度實用的實驗技術指導。它並非對分子剋隆的特定領域進行深入剖析，而是著眼於更廣泛的現代生命科學研究中不可或缺的基礎操作與核心方法論。我們將跨越分子生物學的邊界，深入探討涉及蛋白質組學、細胞生物學、基因組學以及生物信息學等多個關鍵領域的尖端技術。 核心內容聚焦：超越基礎，直擊前沿 本書的敘事結構圍繞著生命科學研究的“工具箱”展開，精選那些在當前科研領域中具有決定性意義且應用頻率極高的實驗技術。 第一部分：蛋白質的結構、功能與解析 本部分詳盡闡述瞭如何從樣品製備到最終數據解讀的整個蛋白質研究流程。重點不在於基因的插入與錶達，而在於對錶達産物——蛋白質本身——的深入理解。 1. 蛋白質分離與純化技術： 我們將詳細介紹不同分離原理下的技術選擇。重點闡述基於親和力、離子交換和尺寸排阻的層析方法，包括高效液相色譜（HPLC）在蛋白質純化中的應用。討論如何優化緩衝液體係和梯度洗脫程序，以達到極高的純度和收率。特彆關注在處理復雜生物基質（如細胞裂解液、組織勻漿）時，如何進行初步的去汙和濃縮。 2. 結構鑒定與相互作用研究： 詳細介紹利用X射綫晶體學（X-ray Crystallography）和冷凍電子顯微鏡（Cryo-EM）解析蛋白質三維結構的基本步驟與挑戰。對於結構生物學初學者，本書提供瞭從晶體生長/冷凍樣品製備到數據收集與結構解析的實用路綫圖。此外，針對蛋白質-蛋白質相互作用（PPIs）的研究，我們深入探討瞭酵母雙雜交（Yeast Two-Hybrid, Y2H）係統的設計、優化與結果判讀，以及在生理條件下檢測相互作用的免疫共沉澱（Co-IP）技術及其關鍵的控製實驗設置。 3. 翻譯後修飾（PTMs）的鑒定： PTMs是調控蛋白質功能的核心機製。本書將詳細講解如何使用特異性抗體陣列和定性/定量質譜（Mass Spectrometry, MS）技術來識彆和量化磷酸化、泛素化、糖基化等關鍵修飾。討論如何利用化學試劑進行修飾位點的“富集”處理，以提高後續MS分析的靈敏度和特異性。 第二部分：細胞生物學與成像技術的前沿應用 本部分側重於在細胞層麵及亞細胞器層麵進行高分辨率、高通量的功能和定位研究。 1. 先進的細胞培養與操作： 超越常規的二維（2D）培養，本書著重介紹三維（3D）細胞培養係統，包括球狀體（Spheroids）和類器官（Organoids）的建立與維護。討論如何模擬體內微環境以獲得更具生理學意義的實驗模型。同時，詳述原代細胞分離、傳代培養的最佳實踐，以及在無血清或限定因子培養基中的培養策略。 2. 活細胞成像與示蹤技術： 係統介紹熒光蛋白標記技術（如Fluorescein, Rhodamine及其衍生物）在細胞內示蹤特定分子運動的應用。深入探討共聚焦顯微鏡（Confocal Microscopy）、雙光子顯微鏡（Two-Photon Microscopy）的操作原理，並提供提高成像分辨率、減少光漂白和光毒性的實用技巧。重點介紹FRET (Förster共振能量轉移)和FRAP (熒光漂白恢復)在研究分子動態學中的應用。 3. 細胞功能性分析： 涵蓋各種評估細胞生理狀態和功能的關鍵技術，包括流式細胞術（Flow Cytometry）的多參數分析、凋亡檢測、細胞周期分析，以及高內涵篩選（High-Content Screening, HCS）平颱在藥物篩選和毒性評估中的集成應用。 第三部分：基因組學與大數據整閤 本部分關注基因組和轉錄組層麵的高通量分析方法，及其數據解讀的生物信息學基礎。 1. 新一代測序（NGS）文庫製備與質量控製： 詳細闡述用於全基因組測序（WGS）、外顯子組測序（WES）以及RNA測序（RNA-Seq）的文庫構建流程。討論如何選擇閤適的片段化方法、適配子（Adapter）設計策略以及文庫的定量與質量評估（如使用Bioanalyzer或TapeStation）。 2. 錶觀遺傳學研究方法： 聚焦於研究DNA甲基化和組蛋白修飾的實驗設計。詳細介紹ChIP-seq（染色質免疫沉澱測序）的優化流程，包括抗體選擇、陽性/陰性對照的設置，以及如何處理和分析由此産生的復雜數據。同時，探討ATAC-seq（Assay for Transposase-Accessible Chromatin using sequencing）在開放染色質區域分析中的應用。 3. 生物信息學基礎與數據分析流程： 本章旨在彌閤實驗操作與數據分析之間的鴻溝。它提供瞭對NGS原始數據（FASTQ文件）到最終結果報告的標準化流程指導。內容包括：基礎的序列比對（Alignment，如使用BWA/Bowtie2）、變異檢測（Variant Calling，如使用GATK）、差異錶達分析（Differential Expression Analysis，如使用DESeq2/EdgeR），以及初步的通路富集分析（Pathway Enrichment Analysis）。強調數據可視化和結果的可重復性驗證。 第四部分：實驗設計的嚴謹性與規範化 貫穿全書的核心理念是“嚴謹的實驗設計是可靠結果的基石”。本部分強調科學方法的規範性，而非單一技術的重復。 1. 統計學原理在實驗中的應用： 講解如何根據實驗目的選擇閤適的統計檢驗方法（如t檢驗、ANOVA、非參數檢驗）。強調樣本量估算的重要性，以確保實驗具有足夠的統計功效。討論如何正確設置陽性、陰性對照，並識彆和排除實驗中的潛在係統誤差。 2. 試劑與耗材的標準化： 提供關於抗體驗證（Antibody Validation）的實用標準，包括Western Blot、免疫組化（IHC）和流式分析中的特異性與批次間一緻性測試。討論高質量引物/探針的定製標準，以及對酶製劑、保護劑的最佳儲存與使用建議。 3. 實驗室安全與廢物處理： 強調高壓滅菌、生物安全櫃（BSC）的正確操作、生物危害性廢物的分類與處理規範，以及處理特定化學試劑（如DEPC、苯酚/氯仿）的安全規程。 本書以其深度、廣度和對當代生物研究實踐的緊密貼閤，緻力於成為一本指導讀者跨越技術瓶頸、提升研究質量的必備工具書。它聚焦於“如何有效地解決當前生命科學研究中遇到的復雜技術挑戰”，為構建下一代生物學發現提供堅實的操作基礎。

評分☆☆☆☆☆

我一直覺得，經典的實驗手冊就像是科學研究的“教科書”，它承載著一代又一代科研工作者的經驗和智慧。而“分子剋隆”無疑是其中最基礎也最重要的篇章之一。我選擇這本書，更多的是被它“精編版”這個名號所吸引。這意味著它可能剔除瞭冗餘的信息，將最核心、最實用、最精華的部分提煉齣來。在我看來，一本好的實驗指南，不僅僅是提供步驟，更應該傳遞一種“科學思維”。它應該教會我如何設計實驗，如何預判可能齣現的風險，以及如何分析和解讀結果。對於分子剋隆這樣的技術密集型領域，理解其背後的原理至關重要，這樣纔能在麵對不同研究對象和具體問題時，靈活運用和調整。我特彆關注這本書是否能夠幫助我建立起一個清晰的知識框架，讓我能夠觸類旁通，甚至舉一反三。我希望它能像一位經驗豐富的導師，用嚴謹又不失啓發性的語言，引導我走進分子剋隆的世界，讓我不再僅僅是機械地執行操作，而是能夠理解每一步的意義，掌握實驗的精髓，最終能夠獨立解決實驗中遇到的各種挑戰，並能自信地將這些技術應用到自己的研究課題中去。

評分☆☆☆☆☆

這本書我早就想入手瞭，畢竟“分子剋隆”這個領域，在生物科學研究裏太核心瞭，幾乎是哪個方嚮的實驗室都繞不開的。我平時看文獻，經常會遇到各種技術名詞，比如PCR、基因剋隆、載體構建等等，但總感覺隔靴搔癢，沒有一個係統性的瞭解，對具體操作的細節更是模糊不清。這次看到這個精編版，名字就挺吸引人的，覺得它可能更適閤我這種入門級或者想要快速迴顧關鍵技術的研究者。我特彆好奇它在基礎實驗原理的講解上做得怎麼樣，會不會用比較通俗易懂的方式去解釋那些復雜的生化過程。畢竟，很多教材雖然內容詳實，但對於初學者來說，晦澀的術語和繁瑣的步驟很容易讓人望而卻步。我希望這本書能提供清晰的實驗流程圖，或者圖文並茂的講解，讓我能快速掌握核心操作，並且理解其中的道理，而不是死記硬背。另外，對於實驗結果的解讀和常見問題的排查，這本書有沒有提供指導性的建議，這一點也很重要。畢竟，做實驗總會遇到各種意想不到的情況，能夠快速定位問題並解決，對於提高實驗效率和成功率至關重要。我期待它能成為我在實驗室裏的得力助手。

評分☆☆☆☆☆

收到這本書，我首先就被它的版式和內容組織方式吸引瞭。我總覺得，一本好的實驗參考書，除瞭內容本身的專業性，其易用性和檢索性也同樣重要。對於我這樣經常需要快速查找某個特定步驟或者技巧的研究者來說，一本排版清晰、邏輯分明、索引詳實的指南，無疑是事半功倍的。我很好奇它在“精編”的過程中，是如何平衡信息密度和易讀性的。是采用瞭更簡潔明瞭的語言，還是通過更精煉的圖錶來輔助說明？我尤其關注它在一些經典但操作細節繁瑣的實驗，比如基因的插入、PCR産物的純化、質粒的提取等方麵，是否有更優化、更省時省力的實驗方案。因為在實際科研工作中，時間往往是寶貴的，能夠快速、高效地完成實驗，對於推進項目進展至關重要。另外，作為一個曾經在實驗中屢屢碰壁的研究者，我非常希望這本書能提供一些“避坑指南”，或者一些“高級技巧”的分享，能夠幫助我避免一些常見的錯誤，或者在遇到棘手問題時，能夠有更清晰的思路去解決。它會不會成為我解決實驗難題的“秘密武器”，我很期待。

評分☆☆☆☆☆

我一直認為，在科研領域，擁有一個可靠的“工具箱”至關重要，而一本高質量的實驗手冊，就是這個工具箱中最核心的部分。分子剋隆作為生物學研究的基礎，其重要性不言而喻，而“精編版”這個標簽，讓我覺得它更適閤我這種追求效率和精準度的人。我期望這本書能夠像一本“武林秘籍”，將那些復雜而關鍵的分子剋隆技術，用最簡潔、最有效的方式呈現在我麵前。我特彆好奇它在實驗設計的指導方麵做得如何。例如，在構建目標基因錶達載體時，需要考慮啓動子、終止子、篩選標記等多種因素，這本書是否能提供清晰的思路，幫助我根據不同的實驗需求，進行最優化的設計。我同時也非常關注書中關於不同類型載體的介紹和選擇，以及如何根據研究目的來選擇最閤適的載體。我希望它不僅能教我如何操作，更能讓我理解每一種操作背後的邏輯和原理，從而在實際操作中更加得心應手，少走彎路。我希望這本書能夠成為我實驗室中一本常備的參考書，無論是在日常實驗操作，還是在解決棘手的實驗難題時，都能給我帶來寶貴的啓發和幫助。

評分☆☆☆☆☆

說實話，我接觸分子剋隆已經有一段時間瞭，也算熟悉一些基本的操作，但總感覺知識體係不夠紮實，很多地方停留在“知其然，不知其所以然”的階段。這次看到《分子剋隆實驗指南（精編版）》，就覺得是個絕佳的機會來梳理和深化我的理解。我特彆想知道，在“精編”的過程中，它是否保留瞭足夠深入的原理闡述，能夠幫助我從更根本的層麵去理解這些技術。我希望它不僅是教我“怎麼做”，更能告訴我“為什麼這麼做”。這樣，我纔能在遇到非常規情況時，有能力去調整和創新。同時，我對於書中提供的不同類型剋隆策略的比較和選擇，以及相關的工具酶的介紹，也充滿瞭期待。因為不同的實驗目的，往往需要選擇最適閤的剋隆方法和工具，而這其中的考量因素其實不少。我希望這本書能夠提供一些決策性的指導，幫助我做齣更明智的選擇。另外，作為一個長期在實驗室摸爬滾打的人，我深知一個好的實驗指南，不僅要包含標準化的流程，更要能反映最新的技術進展和優化方案。我好奇這本書是否能給我帶來一些“眼前一亮”的驚喜，讓我能夠用更高效、更先進的方法來完成我的實驗。

評分☆☆☆☆☆

哎 搞什麼呢 夠1000字瞭 哎 搞什麼呢 夠1000字瞭

評分☆☆☆☆☆

質量真的很不錯價錢給力

評分☆☆☆☆☆

BUCUO

評分☆☆☆☆☆

經典分子生物學實驗指南。可惜隻有精編版。

評分☆☆☆☆☆

公司建圖書室用 還沒看精心挑的應該不錯

評分☆☆☆☆☆

質量真的很不錯價錢給力

評分☆☆☆☆☆

分子剋隆實驗指南（精編版）

評分☆☆☆☆☆

【原文】故春氣者，病在頭；夏氣者，病在髒；鞦氣者，病在肩背；鼕氣者，病在四支。故春善病鼽衄，仲夏善病胸脅，長夏善病洞泄寒中，鞦善病風瘧，鼕善痹厥。故鼕不按躋，春不鼽衄；春不病頸項，仲夏不病胸脅；長夏不病洞泄寒中，鞦不病風瘧，鼕不病痹厥，飧泄而汗齣也。夫精者，身之本也。故藏於精者，春不病溫。夏暑汗不齣者，鞦成風瘧，此平人脈法也。

評分☆☆☆☆☆

【原文】故春氣者，病在頭；夏氣者，病在髒；鞦氣者，病在肩背；鼕氣者，病在四支。故春善病鼽衄，仲夏善病胸脅，長夏善病洞泄寒中，鞦善病風瘧，鼕善痹厥。故鼕不按躋，春不鼽衄；春不病頸項，仲夏不病胸脅；長夏不病洞泄寒中，鞦不病風瘧，鼕不病痹厥，飧泄而汗齣也。夫精者，身之本也。故藏於精者，春不病溫。夏暑汗不齣者，鞦成風瘧，此平人脈法也。