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薛雅蓉，刘常宏 著

图书标签:

• 免疫学
• 实验
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• 生物学
• 生物技术
• 科研
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• 实用
• 精编

出版社： 科学出版社

ISBN：9787030381583

版次：1

商品编码：11304569

包装：平装

开本：16开

出版时间：2013-07-01

用纸：胶版纸

页数：127

字数：202000

正文语种：中文

内容简介

　　《精编实用免疫学实验》通过精选，收集编著了涉及机体免疫功能检测、抗体制备及利用免疫学原理方法进行的抗原抗体检测等先进、实用内容的实验，概括为八大部分：抗体制备、纯化及标记；利用抗原抗体反应进行的检测；机体免疫细胞的分离与鉴定；机体特异性细胞免疫功能的检测；机体体液免疫功能的检测；机体非特异性免疫功能检测；HLA分型；淋巴细胞活化信号转导分子检测。

内页插图

目录

第一篇 抗体的制备、纯化及标记
一、免疫血清的制备及效价检测
实验1 弗氏佐剂的制备及与抗原的混合
实验2 抗原免疫兔子
实验3 免疫血清的分离与保存
实验4 双向琼脂扩散试验检测兔抗羊IgG血清效价
实验5 凝集实验检测兔抗大肠杆菌抗血清效价
二、单克隆抗体的制备
实验6 单克隆抗体的制备
三、抗体的纯化
实验7 盐析法纯化免疫球蛋白
实验8 亲和柱层析法纯化免疫球蛋白
实验9 SDS-PAGE法检测免疫球蛋白纯度
四、抗体的标记
实验10 异硫氰酸荧光素标记IgG抗体
实验11 R-藻红蛋白标记IgG抗体
实验12 辣根过氧化物酶标记IgG抗体
实验13 生物素标记IgG抗体

第二篇 利用标记抗体进行的检测
一、免疫荧光法
实验14 直接免疫荧光法标记人T细胞
实验15 间接免疫荧光法检测大肠杆菌
实验16 免疫荧光法显示细胞的微管
二、酶免疫测定
实验17 间接ELISA检测兔抗羊IgG抗体效价
实验18 夹心ELISA法检测小鼠血清IL.2
实验19 酶联免疫斑点试验检测IFN-y分泌细胞数目
实验20 ELISPOT法检测小鼠脾脏抗羊IgG抗体形成细胞数目
实验21 应用免疫组化ABC法检测小鼠脾脏Thy1.2阳性细胞的分布
实验22 免疫印迹试验

第三篇 免疫细胞的分离与鉴定
一、免疫细胞分离
实验23 密度梯度离心法分离外周血单个核细胞
实验24 Percoll不连续密度梯度离心法分离NK细胞
实验25 小鼠脾脏淋巴细胞分离及活率测定
实验26 肿瘤浸润淋巴细胞的制备
实验27 黏附法分离单核细胞和淋巴细胞
实验28 尼龙毛柱法分离T细胞与B细胞
实验29 E.花环形成法从单个核细胞中分离T细胞
实验30 免疫磁珠分选法分离小鼠脾脏CD4+T淋巴细胞
实验31 流式细胞仪检测小鼠IFN-'y分泌细胞
实验32 小鼠髓源性DC的分离及诱导培养
二、免疫细胞鉴定

第四篇 机体免疫功能检测
一、细胞吞噬相关功能检测
实验33 体外试管法检测小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验
实验34 中性红法检测小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能
实验35 利用流式细胞仪检测巨噬细胞吞噬活性
实验36 巨噬细胞一氧化氮产生量的测定
实验37 中性粒细胞呼吸爆发的检测
二、细胞增殖及活力检测
实验38 MTT比色法检测淋巴细胞活力
实验39 ATP生物荧光检测法检测抗癌药物对肿瘤细胞活力的影响
三、细胞介导的细胞毒试验
实验40 51Cr释放试验
实验41 乳酸脱氢酶释放试验
实验42 涂片染色法检测凋亡细胞
实验43 AnnexinV-FITC/PI双染色法检测凋亡细胞
实验44 凋亡细胞DNA电泳
实验45 TUNEL技术检测凋亡细胞
四、APC抗原提呈功能分析
实验46 树突状细胞抗原提呈能力检测
五、免疫球蛋白的定量
实验47 单向免疫扩散法检测小鼠血清IgG、IgM、IgA
实验48 夹心ELISA法检测小鼠肠液中分泌型IgA水平
六、补体的细胞毒作用检测
实验49 补体的细胞毒作用检测
参考文献

附录一 常用溶液配制方法
附录二 荷瘤小鼠模型建立方法
一、腹水瘤小鼠模型建立方法
二、小鼠移植性实体瘤模型的建立
附录三 南京大学生命科学学院本科生免疫学实验教学内容及安排

精彩书摘

　　三、抗体的纯化
　　在许多情况下我们需要用纯化抗体进行研究及检测。
　　抗体有多种来源。单克隆抗体可从杂交瘤细胞培养上清液中纯化；多克隆抗体可从血清中纯化；基因重组抗体因表达系统不同可存在于表达受体细胞培养液或细胞内，且胞内表达往往以聚集、无活性的包含体的形式存在。胞外可溶性表达抗体可直接纯化，胞内包含体形式的抗体纯化后还需要通过复性使其转变为活性形式。
　　基于抗体的来源及纯度要求不同，抗体纯化方法也不同。一般应综合考虑产量和纯度，尽可能用较少的纯化步骤获得较高纯度的目标蛋白。沉淀法是一种快速但纯度不高的纯化方法，一般用高浓度盐溶液使抗体沉淀而与溶液中的脂类、碳水化合物、核酸、低分子质量蛋白质等物质分开。这种用盐沉淀蛋白的方法也称为盐析法，常常用在蛋白纯化的起始阶段。除了盐，也用一些多聚物（如PEG）及有机溶液沉淀蛋白质。
　　抗体纯化的传统方法在盐析法之后常常还包括好几个步骤，但现在普遍使用的亲和层析法可使纯化步骤大为减少，甚至只需一步就可获得高产量和高纯度的目标抗体。该法利用抗体与固定在胶基质上的特定配体的特异、可逆结合将抗体与溶液中其他物质分开，是获得纯净抗体的理想方法，分离纯度可达99%，产量可达10%-50%。亲和配体若是与某种抗体同种型结合的蛋白A和蛋白G，得到的纯化抗体即为某种同种型抗体，如IgG、IgM或IgA；亲和配体若为特定抗原，得到的抗体即为抗原特异性抗体。
　　在抗体纯化过程中，目标抗体的监测非常重要。一个快速、简单的蛋白浓度监测方法是在280nm波长处进行光度测量。要进行抗体的特异监测，可应用ELISA法、SDS-PAGE法或WesternBlot法。
　　实验7盐析法纯化免疫球蛋白
　　利用一定浓度的盐溶液使混合蛋白溶液中某种蛋白质成分析出而得到纯化的蛋白质的纯化方法通常称为蛋白质的盐析。是一种快速但所得蛋白纯度不高的蛋白粗提方法。
　　硫酸铵、硫酸钠、硫酸镁、氯化钠等盐都能使蛋白质发生盐析。硫酸铵因其在水中溶解度高且受温度影响较小而最常应用。一般认为，在pH7.0时，50%的饱和硫酸铵可将所有的免疫球蛋白都沉淀出来；33%饱和度时，大部分IgG可沉淀出来；40%饱和度时，IgG沉淀物的得率最高，但含p球蛋白部分增多。
　　……

前言/序言

《精编实用免疫学实验》一书，正如其名，专注于免疫学实验的精细编排与实用性。这本书的宗旨在于为广大免疫学研究者、学生以及相关从业人员提供一套系统、可靠、易于操作的实验指南。 本书的内容涵盖了免疫学研究中最核心、最基础的实验技术和方法。它并非一本理论性质的教材，而是以动手实践为导向，旨在让读者能够扎实掌握免疫学实验的原理、步骤、操作要点以及结果的解读。 具体而言，本书的章节设计紧密围绕免疫学研究的关键环节展开，力求全面而深入。 在引言部分，本书会详细介绍免疫学实验在现代生命科学研究中的重要地位和广泛应用，阐述掌握实验技能对于理解免疫系统运作机制、疾病诊断与治疗的重要性。同时，也会对实验室安全规范、常用仪器设备进行详细说明，为读者打下坚实的基础。 随后，本书将系统梳理免疫学实验的基本技术。这包括： 细胞分离与培养技术： 详细讲解如何从外周血、淋巴组织等来源分离各种免疫细胞，如淋巴细胞、单核细胞、巨噬细胞、树突状细胞等。同时，会提供多种细胞培养基的配制方法，以及无菌操作、细胞传代、细胞计数等关键技术。书中还会针对不同细胞类型的培养特点，提供优化培养条件的建议。 免疫细胞鉴定与功能分析技术： 重点介绍流式细胞术（Flow Cytometry）的应用，包括抗体标记、细胞分群、表面标志物检测（如CD标记物）等。此外，还会深入讲解细胞因子检测（ELISA, Luminex等）、细胞毒性测定、增殖测定（MTT, BrdU等）等，以全面评估免疫细胞的功能状态。 抗体相关实验技术： 详细阐述抗体制备的原理和常用方法，包括多克隆抗体和单克隆抗体的制备流程。在抗体应用方面，会重点介绍Western Blot（用于检测特定蛋白表达）、免疫组化（IHC）和免疫荧光（IF）（用于观察蛋白在组织或细胞中的定位）、ELISA（用于定量检测抗原或抗体）等经典而重要的技术。书中会提供实验优化的详细指导，例如抗体稀释度的选择、封闭液的配制、显色方法的选择等，以获得清晰、准确的结果。 分子生物学技术在免疫学中的应用： 阐述如何利用PCR、qPCR等技术检测免疫相关基因的表达水平。还会介绍Western Blot在检测免疫信号通路中关键蛋白磷酸化状态等方面的应用。 动物模型与体内实验技术： 针对需要动物实验的研究，本书会详细介绍动物模型的建立（如免疫缺陷模型、诱导自身免疫疾病模型等），以及动物给药、取材、器官处理等规范操作。 生物信息学辅助免疫学研究： 简要介绍如何利用公共数据库（如NCBI, UniProt）获取基因和蛋白信息，以及常用的生物信息学工具在免疫学数据分析中的辅助作用，为研究者提供更广阔的研究视野。 本书的核心特色在于其“精编”和“实用”。 “精编”体现在： 体系化： 章节之间逻辑清晰，层层递进，构成完整的实验知识体系。 细节化： 每一个实验步骤都力求描述详尽、准确，包括试剂配制、仪器设置、操作技巧、注意事项等。 图文并茂： 大量配有清晰的实验流程图、仪器操作图、典型实验结果图，帮助读者直观理解。 “实用”则体现在： 操作指导性强： 严格按照实际操作流程编写，读者可照章操作，减少摸索时间。 结果分析详尽： 每个实验技术都附带典型结果的解读，帮助读者理解实验结果的意义，并掌握判断实验是否成功的标准。 常见问题与对策： 针对实验中可能遇到的常见问题，本书会提供排查思路和解决对策，大大提高实验成功率。 优化建议： 在许多实验技术介绍中，会给出优化实验条件的建议，以适应不同研究需求。 本书的目标读者广泛，包括但不限于： 免疫学专业在校学生： 帮助他们建立扎实的实验基础，为后续的科研训练打下坚实基础。 生命科学相关专业的学生： 学习和掌握免疫学实验技术，拓展研究视野。 免疫学领域的科研人员： 作为一本随时查阅、解决实验难题的参考工具书。 临床检验技师、生物制药研发人员： 掌握相关的实验技能，提升工作效率和准确性。 总而言之，《精编实用免疫学实验》是一本以实践为核心，理论与操作相结合的实验手册。它不仅能教会读者“做什么”，更能教会读者“怎么做”，并帮助读者理解“为什么这样做”。通过本书的学习和实践，读者将能够独立、规范、高效地开展免疫学相关的实验研究。

评分☆☆☆☆☆

这本书的纸质摸起来很舒服，封面的设计简约大气，一看就很有专业感。我一直对生物领域很感兴趣，尤其对生命如何抵御外界的侵袭感到好奇。一直想找一本既能科普又能深入浅出的书来系统地了解免疫系统的运作机制。我之前也翻阅过一些关于免疫学的书籍，但总觉得要么过于学术化，读起来很费劲，要么就是太泛泛而谈，缺乏实质性的内容。所以，当我在书店看到这本书时，简直眼前一亮。书名“精编实用”几个字就足够吸引人了，我揣测它一定经过了精心挑选和编排，并且更侧重于实际应用，这正是我所需要的。我期待它能为我打开一扇了解免疫世界的大门，让我能够更清晰地认识到我们身体内部的“守护者”是如何工作的，以及它们在维护我们健康方面扮演着怎样的关键角色。我希望这本书能用通俗易懂的语言，结合生动的图例，将复杂的免疫学概念一一剖析，让我这个非专业人士也能轻松理解，并且在阅读过程中，不时地能产生“原来是这样！”的顿悟感。

评分☆☆☆☆☆

翻开这本书，一股淡淡的油墨香扑鼻而来，让人心旷神怡。我一直以来都对生命科学的奇妙之处着迷，特别是我们身体内部的免疫系统，它就像一个精密运作的军事指挥部，时刻保卫着我们的健康。随着年龄的增长，我越来越意识到身体健康的重要性，也越来越渴望了解那些看不见的“战士”是如何默默工作的。我之前也读过一些免疫学的入门书籍，但总觉得它们要么过于理论化，缺乏实践指导，要么就是过于浅显，无法满足我进一步探索的渴望。这本书的“精编实用”这几个字，恰恰击中了我的需求点。我希望它能像一位经验丰富的老师，用最清晰、最有条理的方式，向我展示免疫学的核心概念，从抗原识别到免疫记忆，从先天免疫到适应性免疫，都能够被深入浅出地讲解。我期待它能够为我提供一些实用的建议，让我能够更好地理解和维护自己的免疫系统，拥有更健康的生活。

评分☆☆☆☆☆

初拿到这本书，我就被它的装帧深深吸引了。厚实有质感的封面，搭配上沉静而富有内涵的书名，散发出一种严谨又不失温度的气息。作为一名对此领域稍有了解的爱好者，我总是在寻找能够填补我知识盲区，同时又能激发我更深层次思考的读物。现有的文献和资料，虽然在某些特定方面提供了深入的见解，但往往缺乏一个宏观而又详实的整体框架。我希望能有一本书，能够系统地梳理免疫系统的演化历程，从基础的细胞识别机制，到复杂的信号转导通路，再到不同免疫细胞之间的协同作用，都能被清晰地勾勒出来。更重要的是，我希望它能展现免疫系统在应对各种病原体入侵时的精妙策略，以及在自身免疫疾病、过敏反应等异常情况下的失调表现。这本书的名字让我觉得它可能正是这样一本能够满足我多方面需求的“百科全书”式的著作，能让我站在更高的维度去审视和理解免疫学这门博大精深的科学。

评分☆☆☆☆☆

这本书的封面设计很有学术氛围，纸张的质感也很好，捧在手里很有分量。作为一名对生命科学充满好奇的读者，我一直以来都对免疫学这个领域抱有浓厚的兴趣。我希望能够通过阅读一本书，系统地了解免疫系统的基本原理、组成部分以及它们是如何相互协作来保护我们的身体免受疾病的侵害。我曾经阅读过一些相关的文章和科普读物，但它们往往零散且不够深入，难以形成一个完整的知识体系。而这本书的书名“精编实用”引起了我的注意，我猜想它可能在内容编排上非常精炼，并且在实用性方面有所侧重。我期待它能够为我提供关于免疫系统工作机制的详细讲解，包括各种免疫细胞的功能、免疫应答的类型、疫苗的作用原理等等。同时，我也希望这本书能够包含一些与日常生活相关的免疫学知识，例如如何通过生活方式来提高免疫力，以及如何应对常见的免疫相关疾病。

评分☆☆☆☆☆

这本书的触感和视觉冲击力都很棒。我一直对医学和生命科学领域有着浓厚的兴趣，尤其是在疫情爆发之后，大家对免疫系统的关注度空前提高。我希望能找到一本真正能够帮助我理解我们身体是如何对抗病毒、细菌以及其他威胁的读物。市面上有很多关于免疫的科普读物，但很多都过于简略，或者在科学严谨性上有所欠缺。而我希望找到的，是一本能够提供更详尽、更深入的解释，同时又不至于让普通读者望而却步的书。这本书的“精编实用”这几个字，让我觉得它可能在内容上做到了详略得当，既保证了学术的深度，又考虑到了实践的意义。我期待它能够带领我深入探索免疫细胞的多样性，了解它们的产生、分化和功能，以及它们如何协同作战，形成一道强大的防线。我希望它能让我明白，为什么有些人在面对疾病时表现出不同的抵抗力，以及我们自身可以通过哪些方式来增强免疫力。