PCR理论与技术(第三版) 王廷华,刘佳,夏庆杰,景强,习杨彦彬 科学出版社 pdf epub mobi txt 电子书 下载 2025

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王廷华，刘佳，夏庆杰，景强，习杨彦彬 著

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出版社： 科学出版社

ISBN：9787030379344

版次：1

商品编码：1740290230

包装：平装

出版时间：2013-06-01

基本信息

书名：PCR理论与技术(第三版)

作者：王廷华,刘佳,夏庆杰,景强,习杨彦彬

出版社：科学出版社

出版日期：2013-06-01

ISBN：9787030379344

字数：286000

页码：177

版次：1

装帧：平装

开本：16开

商品重量：0.4kg

编辑推荐

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内容提要

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《PCR理论与技术（第3版）》是《PCR理论与技术（第3版）》的一个分册，分上、下篇，共13章。上篇主要介绍PCR基础理论和技术操作知识，以及技术操作中可能遇到的各种问题的解决方法。下篇介绍PCR相关技术的应用，包括PCR技术在构建cDNA文库、测序及基因突变检测，性别鉴定，动植物、微生物DNA分型研究中的应用；PCR技术分析DNA序列多态性、VNTR和STR；PCR技术检测CDK4敲入转基因鼠的基因型；PCR体系中模板DNA浓度与PCR扩增效率的关系。
《PCR理论与技术（第3版）》可供生物医学专业研究生、本科生及从事分子生物学研究的科研人员阅读和实验时参考。

目录

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上篇 PCR的基本理论与技术
第一章 常规PCR技术的原理与方法
第一节 PCR技术的发展简史
第二节 PCR技术的基本原理
第三节 PCR反应体系与反应条件
第四节 PCR反应体系和反应条件的优化
第五节 PCR反应的保真性
第六节 PCR常见问题及对策
第二章 PCR模板制备
第一节 基因组DNA提取技术
第二节 RNA提取技术与cDNA模板的制备
第三章 PCR扩增产物处理与PCR实验室
第一节 PCR扩增产物分析与处理
第二节 PCR产物的纯化
第三节 PCR污染与对策
第四节 PCR技术实验室
第四章 定量PCR技术
第一节 定量PCR的基本概念与基本原理
第二节 实时荧光定量PCR
第五章 原位PCR相关技术
第一节 原位PCR
第二节 原位PCR的分类
第三节 原位PCR技术流程
第六章 其他PCR相关技术进展
第一节 反向PCR技术
第二节 巢式PCR
第三节 多重PCR
第四节 串联重复序列的PCR扩增
第五节 RAPD技术
下篇 PCR相关技术的应用
第七章 PCR技术在构建cDNA文库、测序及基因突变检测中的应用
第一节 PCR在cDNA文库构建中的应用
第二节 PCR在DNA测序中的应用
第三节 PCR技术在基因突变检测中的应用
第八章 PCR技术分析DNA序列多态性
第一节 DNA的两种多态性和遗传标记分类
第二节 PCR技术分析DNA序列多态性
第九章 PCR技术分析VNTR和STR
第一节 概述
第二节 扩增片段长度多态性分析分型技术基本原理
第三节 用PCR技术分析小卫星VNTR基因座分型的基本技术
第四节 用PCR技术分析微卫星(STR)基因座
第十章 PCR技术在性别鉴定中的应用
第一节 概述
第二节 PCR扩增的基本方法
第三节 讨论
第十一章 PCR技术在动植物、微生物DNA分型研究中的应用
第一节 概述
第二节 实验方法与步骤
第三节 结果与讨论
第十二章 PCR技术检测CDK4敲入转基因鼠的基因型
第一节 实验原理
第二节 实验方法
第三节 实验结果
第四节 结果分析及注意事项
第十三章 PCR体系中模板DNA浓度与PCR扩增效率的关系
第一节 实验目的
第二节 实验方法
第三节 实验结果
第四节 结果分析

作者介绍

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文摘

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序言

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生物技术前沿进展与应用：方法、实践与展望 本书聚焦于当代生命科学研究中的核心技术领域，深入探讨了从基础原理到前沿应用的一系列关键方法论。内容涵盖了分子生物学、细胞生物学、基因组学、蛋白质组学以及生物信息学等多个交叉学科的前沿动态。本书旨在为生命科学领域的研究人员、研究生以及高新技术产业的专业人员提供一份全面、深入且具有实践指导意义的参考资料。 第一部分：分子生物学基础与高级技术 第一章：核酸操作的精度革命：新一代测序技术（NGS）的深度解析 本章系统阐述了新一代测序技术（Next-Generation Sequencing, NGS）从原理、平台演变到数据分析的全过程。重点介绍了Illumina测序平台的高通量优势及其碱基识别机制。内容细致剖析了不同类型的测序应用，包括全基因组测序（WGS）、全外显子组测序（WES）、RNA测序（RNA-Seq）及其在转录组研究中的定量优势。特别探讨了长读长测序技术（如PacBio和Oxford Nanopore）的兴起，及其在解决复杂基因组组装和结构变异检测中的独特价值。此外，还深入分析了文库构建、质量控制以及原始数据处理中的关键技术瓶颈和优化策略。 第二章：基因编辑技术的迭代与精确调控 本章深入研究了基因编辑技术的发展历程，着重于CRISPR/Cas系统的最新突破。详细解析了Cas9、Cas12等核酸酶的作用机制，以及通过引导RNA（gRNA）实现靶向切割的精确性。本书超越了基础的基因敲除，着重介绍了碱基编辑器（Base Editors）和先导编辑器（Prime Editors）等第二代和第三代技术的原理，探讨它们如何实现单碱基替换或小片段插入/缺失而无需引入双链断裂（DSB），极大地提高了编辑的安全性和精确性。内容还包括基因编辑的体内外递送策略（如病毒载体和非病毒载体）的效率比较与优化。 第三章：蛋白质结构解析与功能探究的最新范式 本章聚焦于蛋白质组学和结构生物学的前沿技术。系统阐述了冷冻电子显微镜（Cryo-EM）在解析大分子复合物高分辨率三维结构方面的突破性进展，对比了其在结构生物学中的应用优势与挑战。在蛋白质相互作用组学方面，详细介绍了基于亲和纯化质谱（AP-MS）和酵母双杂交（Y2H）的高通量筛选技术，并探讨了原位（in situ）相互作用捕获技术（如BioID和TurboID）在揭示细胞内动态网络中的作用。此外，本章还涵盖了化学蛋白质组学，特别是探针设计和活性位点识别的技术细节。 第二部分：细胞与组织水平的成像技术 第四章：活细胞成像的动态监测与高分辨率重建 本章全面介绍了用于活细胞实时成像的技术体系。详细阐述了荧光显微镜技术的经典（如共聚焦）到尖端（如STED、PALM/STORM等超分辨显微技术）的发展脉络。重点讨论了荧光探针和报告基因系统的设计原则，以及如何利用光漂白和光激活技术实现对特定分子事件的时间追踪。内容还包括活细胞成像中克服光毒性、实现长时间活体记录的策略，以及多色成像中光谱串扰的校正方法。 第五章：组织学与空间转录组学的融合 本章深入探讨了如何将分子信息与组织空间背景相结合的研究范式。详细介绍了空间转录组学（Spatial Transcriptomics）技术，包括原位测序（In Situ Sequencing, ISS）和基于捕获点阵（LCM）的方法。本书不仅描述了这些技术如何重建组织内的基因表达图谱，还着重分析了相关数据如何用于定义细胞在复杂微环境中的异质性及相互关系。对于组织切片的制备、免疫荧光与组织学染色的联合分析，以及数据空间对齐（Spatial Alignment）的技术难点进行了详尽论述。 第三部分：生物信息学与大数据整合分析 第六章：高通量数据的统计建模与机器学习应用 本章是针对生物学大数据分析的核心方法论介绍。详尽讲解了从原始测序数据（FASTQ）到可解释生物学结论的完整流程，包括质量控制、比对、定量和差异分析。在统计建模方面，重点介绍了处理RNA-Seq数据的负二项分布模型（如DESeq2和edgeR）的适用性。更进一步，本章深入探讨了深度学习（Deep Learning）在基因组学中的前沿应用，例如卷积神经网络（CNN）在识别增强子元件和预测非编码区功能中的作用，以及循环神经网络（RNN）在序列预测中的潜力。 第七章：生物网络构建与系统生物学整合 本章着眼于将离散的分子数据整合成功能性系统模型。详细阐述了基因调控网络（GRN）和蛋白质-蛋白质相互作用网络（PPI）的构建方法，包括基于信息论（如互信息）和基于统计推断的方法。内容涵盖了网络拓扑分析（如中心性指标、模块发现），并介绍了动态网络建模（如微分方程模型）在模拟细胞状态转换中的应用。本书强调了整合多组学数据（如基因组学、转录组学、代谢组学）以构建更具鲁棒性的系统模型的方法论。 第四部分：应用前沿与产业转化 第八章：细胞疗法（CAR-T/NK）的设计、优化与规模化生产 本章聚焦于当前生物医学领域最热门的细胞治疗技术。系统梳理了嵌合抗原受体T细胞（CAR-T）和自然杀伤细胞（CAR-NK）的设计原理，包括不同代际CAR结构（如共刺激结构域的选择）对激活和持久性的影响。内容深入讨论了如何利用基因编辑技术优化T细胞或NK细胞，以增强其抗肿瘤活性并克服肿瘤微环境的抑制。此外，本章还详细探讨了用于GMP级别大规模生产的工艺流程优化、质量控制（QC）标准建立以及临床前有效性评估的模型选择。 第九章：微生物组与宿主相互作用的调控策略 本章关注肠道、皮肤等微生物群落与宿主健康之间的复杂关系。详细介绍了宏基因组学（Metagenomics）和宏转录组学（Metatranscriptomics）在描绘微生物群落结构和功能活性方面的技术差异。内容重点分析了微生物代谢产物（如短链脂肪酸）作为信号分子对宿主生理（如免疫、神经系统）的影响机制。在调控策略方面，本书探讨了益生菌、合生菌的设计原则，以及粪菌移植（FMT）的标准化挑战与未来发展方向。 第十章：生物传感与即时诊断（POC）技术展望 本章探讨了将生命科学发现转化为快速、便携式检测系统的技术路径。详细介绍了基于微流控芯片（Microfluidics）的样本处理技术，以及如何将分子识别元件（如核酸探针、抗体、适配体）集成到电化学、光学或基于纳米材料的传感器平台。内容涵盖了从样本采集到结果输出的集成化设计理念，并探讨了利用数字PCR（dPCR）等高灵敏度技术实现早期疾病的床旁诊断（Point-of-Care Testing, POCT）的工程挑战与解决方案。 --- 本书的特点： 理论与实践并重： 每个技术章节都包含必要的理论基础阐述和最新的实验操作优化建议。 前沿性： 紧跟生命科学领域最新发表的突破性技术，如Prime Editing、Cryo-EM解析、空间组学等。 跨学科整合： 强调分子生物学、生物信息学与工程技术的交叉融合，为解决复杂生物学问题提供多维度工具箱。 面向未来： 探讨了从基础研究到临床转化和产业应用的关键技术瓶颈及未来十年可能的技术演进方向。

评分☆☆☆☆☆

这本书简直是我在学习PCR过程中遇到的“及时雨”！作为一名刚入门的博士生，之前对PCR的理解仅仅停留在教科书上的基本概念，遇到实际操作中的问题时，总是感觉力不从心。读了这本书之后，我最大的感受就是“豁然开朗”。它不仅仅讲解了PCR的原理，更深入地剖析了影响PCR效率的各种因素，比如模板DNA的质量、dNTP的浓度、Mg2+的浓度、退火温度等等，并给出了详细的优化建议。我尤其欣赏书中对“温度梯度PCR”的介绍，以前只知道有这个技术，但具体怎么设置梯度、如何解读结果，一直很模糊。这本书里不仅有清晰的图示，还有具体的案例分析，让我一下子就明白了其中的奥妙，这对于我今后在摸索最佳退火温度时，节省了大量的试错时间和试剂。另外，书中对PCR产物的鉴定和分析方法，比如琼脂糖凝胶电泳、Sanger测序、高通量测序等，也都有非常详细的介绍，让我对PCR的应用有了更全面的认识。这本书让我觉得，PCR不再是一个神秘莫测的“黑匣子”，而是可以通过科学的原理和精细的操作来掌握的强大工具。

评分☆☆☆☆☆

作为一名生物技术专业的学生，PCR实验是我们日常实验中必不可少的一部分。这本书的内容，简直就是我们期末考试复习的“定海神针”！它对PCR的各个方面都做了非常详尽的阐述，无论是反应体系的组分，还是各个组分的作用机制，都讲解得非常到位。我特别喜欢书中的图解，把那些复杂的分子相互作用描绘得一目了然。还有就是关于“DNA聚合酶”的介绍，书中详细对比了不同种类的DNA聚合酶的特性，比如热稳定性、保真性、延伸速度等，并且结合实际应用场景，给出了选择建议。这让我对不同聚合酶的优势和劣势有了清晰的认识，也让我理解了为什么在某些实验中需要选择特定的酶。这本书还对PCR的常见问题及解决策略进行了系统的梳理，比如引物二聚体、非特异性扩增、扩增效率低等，提供了非常实用的排除故障指南。这对于我们这些新手来说，简直是“救命稻草”！读完这本书，我对PCR的理解提升了一个档次，自信心也大大增强。

评分☆☆☆☆☆

坦白说，在入手这本书之前，我对于PCR的认知是碎片化的，主要依靠零散的文献和网络资料。这次有幸读到《PCR理论与技术(第三版)》，感觉像是为我构建了一个完整而坚实的知识体系。书中的逻辑非常清晰，从基础的PCR反应机制，到各种改良型PCR技术，再到PCR在基因诊断、分子进化、法医鉴定等领域的应用，层层递进，环环相扣。我印象最深刻的是关于“定量PCR (qPCR)”的章节，它不仅仅介绍了SYBR Green法和TaqMan探针法的原理，还深入探讨了各种影响定量准确性的因素，比如标准曲线的绘制、内参基因的选择、数据分析方法等。书中还提供了很多实用的操作技巧和注意事项，比如如何避免交叉污染、如何正确使用仪器等，这些都是在理论教学中很难接触到的宝贵经验。读这本书，我感觉自己仿佛置身于一个经验丰富的导师的实验室，在他的指导下，一点点地掌握PCR的“秘籍”。这本书对我最大的价值在于，它帮助我从“知其然”上升到“知其所以然”，让我对PCR技术有了更深刻的理解和更高的操作水平。

评分☆☆☆☆☆

这本书的内容深度和广度都让我非常满意。在理论方面，它不仅覆盖了PCR的基本原理，还深入探讨了其背后的分子生物学机制，让我对PCR反应的每一步都了然于心。在技术方面，它详细介绍了各种改良型PCR技术，比如长片段PCR、高保真PCR、巢式PCR等等，并且结合实际应用，分析了这些技术的优缺点和适用范围。我尤其欣赏书中关于“PCR优化”的章节，它系统地阐述了影响PCR效率的各个因素，比如模板DNA的质量、dNTP的浓度、Mg2+的浓度、退火温度、循环次数等，并且提供了详细的优化步骤和实验设计思路。这让我意识到，PCR实验并非一成不变，而是需要根据具体的实验目的和样本特点进行精细的优化。此外，书中还对PCR在基因克隆、基因分型、突变检测等领域的应用进行了详尽的介绍，为我提供了很多启发性的思路。总而言之，这本书是一本集理论、技术、应用为一体的优秀教材，无论你是初学者还是有一定经验的研究者，都能从中获益匪浅。

评分☆☆☆☆☆

拿到这本书时，我最先被它的装帧吸引了，简洁大方，科学出版社的出品果然有保证。迫不及待地翻开，首先映入眼帘的是那清晰的排版和流畅的文字，阅读体验就如同在咖啡馆里享受一杯温热的拿铁，舒适而惬意。书中的插图和表格更是点睛之笔，将那些抽象的分子生物学概念具象化，让我这个对PCR稍有了解但又希望深入挖掘的读者，能够更直观地理解其原理。尤其是关于引物设计那一部分，作者的讲解由浅入深，循序渐进，从最基础的原则讲到各种优化策略，还结合了大量的实例分析，这对于我在实际科研操作中遇到的各种棘手问题，提供了非常实用的指导。我特别喜欢其中关于特异性设计的部分，详细阐述了如何避免非特异性扩增，以及在面对复杂的基因组背景时，如何选择合适的引物组合。这部分内容的处理，展现了作者深厚的学术功底和丰富的实践经验，让我觉得这本书不仅仅是理论的堆砌，更是智慧的结晶。而且，书中对不同PCR技术变种的介绍，比如RT-PCR、qPCR、ddPCR等，也都有详尽的描述，这让我对PCR技术的多样性和应用前景有了更全面的认识，也为我今后选择和优化实验方案提供了宝贵的参考。