內容簡介
《臨床分子生物學檢驗技術實驗指導》包括32個實驗,內容分為七大部分:分子生物學檢驗技術實驗室介紹;核酸的分離與純化;核酸擴增技術;核酸分子雜交技術;分子剋隆技術;其他分子檢驗技術;創新性實驗、設計性實驗及綜閤性實驗。各校可根據自身條件、要求的不同進行取捨和組閤,建議實驗教學時數為30-60學時。
《臨床分子生物學檢驗技術實驗指導》具有以下特點:①注重基礎知識和技能的訓練,從微量移液器的使用到分子生物學實驗室的規範操作及基本實驗,從試劑配製到具體操作,力求詳細,方便教學;②加強有臨床應用價值或應用前景的技術及項目的介紹,如PCR技術、基因突變的檢測等;③增加刨新性實驗、設計性實驗及綜閤性實驗,增強對學生創新能力和綜閤素質的培養。有些綜閤性、設計性實驗來自科研課題,內容新、方法先進,有利於學生掌握新知識、新技術。
目錄
第一部分 分子生物學檢驗技術實驗室
一、分子生物學檢驗技術實驗須知
二、分子生物學檢驗技術實驗室介紹
三、分子生物學檢驗技術常用儀器介紹
四、分子生物學實驗室生物安全
第二部分 核酸的分離與純化
實驗1 真核基因組DNA的分離與純化
實驗2 真核細胞mRNA的分離與純化
實驗3 質粒DNA的提取
實驗4 核酸的鑒定
第三部分 核酸擴增技術
實驗5 聚閤酶鏈反應
實驗6 PCR-RF1P檢測綫粒體DNAA3243G異質性突變
實驗7 等位基因特異性擴增法檢測結核分枝杆菌rpoB基因突變
實驗8 TRAP一銀染法檢測端粒酶活性
實驗9 多重PCR檢測測a-地中海貧血基因缺失
實驗10 PCR-SSCP檢測苯丙酮尿癥苯丙氨酸羥化酶基因外顯子7突變
實驗11 實時熒光定量PCR檢測乙型肝炎病毒(HBv)核酸
實驗12 逆轉錄.聚閤酶鏈反應檢測甘油醛-3-磷酸脫氫酶mRNA
第四部分 核酸分子雜交技術
實驗13 探針的製備
實驗14 DNA分子雜交
實驗15 RNA分子雜交
實驗16 熒光原位雜交
實驗17 反嚮斑點雜交法檢測B-地中海貧血
第五部分 分子剋隆技術
實驗18 DNA的限製性內切酶酶切反應
實驗19 目的片段的連接
實驗20 感受態細胞的製備及重組子轉化
實驗21 重組子的鑒定
第六部分 其他分子檢驗技術
實驗22 真核細胞基因轉染技術
實驗23 Western印跡
實驗24 雙嚮聚丙烯酰胺凝膠電泳
實驗25 H1A基因分型
實驗26 乙型肝炎病毒基因分型(芯片法)
實驗27 PCR-熒光探針法檢測CYP2C19基因多態性
第七部分 創新性實驗、設計性實驗及綜閤性實驗
實驗28 采用導流雜交基因芯片技術進行人乳頭瘤病毒基因分型
實驗29 采用多重連接依賴探針擴增技術檢測抗肌萎縮蛋白基因突變
實驗30 人肝癌相關microRNA一21的定量檢測
實驗31 熒光素酶報告基因的製備
實驗32 基因重組
附錄 分子生物學檢驗技術實驗中常用試劑和緩衝液的配製
精彩書摘
《臨床分子生物學檢驗技術實驗指導》:
三、分子生物學檢驗技術常用儀器介紹(一)微量移液器微量移液器(pipette)是分子生物學中最常用的計量儀器。其工作原理是通過內部密封的不銹鋼活塞和彈簧,用手指按壓和放鬆按鈕來吸取和排齣液體。在使用移液器的過程中,應注意以下幾方麵:①必須根據設計容量選用適當型號的移液器,調整數輪的讀數不得超過其標稱的容量範圍,否則會損壞移液器;②吸取不同類彆的溶液應更換吸頭,防止試樣之間交叉汙染,不同個體的體液標本也應更換吸頭,否則會嚴重影響檢驗結果;③新吸頭在使用前可吸排溶液幾次,浸漬吸頭以消除測量誤差;④移液器吸液後嚴禁倒置、平放,以免溶液流入內腔,損壞活塞;⑤移液器不用時應存放在專用的支架上,不得任意放置;⑥長時間不用或剛取齣的新移液器應輕輕用手推動按鈕上下按壓幾次,再進行正常使用;⑦注意正確讀數,目前有的移液器是電子顯示,一般難以齣錯,但對於手動調節的應特彆注意。吸取液體時隻能輕按第一擋,排齣液體時需要按到第二擋;吸取液體時不可快速吸取。(二)水純化裝置分子生物學實驗對用水質量要求極高,器皿需經酸泡和自來水洗淨後用雙蒸水漂洗數次,配製各種溶液更是要求用三蒸水或超純水。水純化裝置主要包括:單蒸器、石英玻璃雙蒸餾器、離子交換器及超純水裝置等。(三)離心機離心機是分子生物學實驗中最常用的一類儀器,主要用於收集和分離細胞、細胞器和生物大分子等。實驗用離心機可按其轉速分為低速離心機(普通離心機)、高速離心機和超速離心機三種類型。
在分子生物學實驗中應用最多的是颱式高速離心機,一般分為常溫和冷凍兩種,最大轉速一般在12000~20000g,這類儀器特彆適閤於生物大分子在Eppendorf管內微量操作後的處理,最少可供0.05ml樣品的離心。
(四)電泳裝置
電泳裝置由電泳儀和電泳槽兩部分組成。它主要用於檢測、鑒定各種生物大分子的純度、含量及描述它們的特徵,此外它還是分離、純化、迴收和濃縮樣品的主要工具。
1.電泳儀它是作為電泳時的外加電源設備,將220V交流電整流後通過穩壓器,它既能輸齣穩定的電流,又能輸齣穩定的電壓,起到在被分離樣品兩端加外接電場的作用。常見的電泳儀有常壓電泳儀(輸齣電壓為0~500V,電流0~150mA)、中壓電泳儀(輸齣電壓400~1000V)、高壓電泳儀(輸齣電壓高於lkV),另外還有一些特殊的電泳儀,如毛細管電泳儀、脈衝電場凝膠電泳儀、轉移電泳儀等。
2.電泳槽電泳槽是電泳的主要部件,是樣品分離的場所。槽內裝有電極、緩衝液槽、電泳支持架等,有的還有散熱裝置如循環水等。電泳槽種類很多,有平臥式、垂直闆式、圓柱式、立闆式、懸掛式等。
……
前言/序言
臨床分子生物學檢驗技術實驗指導 epub pdf mobi txt 電子書 下載 2024
臨床分子生物學檢驗技術實驗指導 下載 epub mobi pdf txt 電子書